· poliakrilamidGel mora akrilamidnim monomerom, početnim materijalom polimerizacije, katalizatorom i pravom smjese soli i pufera.
· akrilamida bis (n, n '- metilen dvostruki akrilamid) je gel matrica oblika monomera.
· Proces ljepljive polimerizacije amonijevog persulfata. Formulacija ljepila zahtijeva 10% otopinu amonijevog persulfata pripremljenu u vodi. Većina informacija ukazala je na potrebu za aktivnom uporabom. Međutim, 10% otopina može se postaviti na 4 ℃ nekoliko tjedana bez značajnog gubitka aktivnosti. Napravite do 10 ml i odbacite kada ljepilo ne uspije agregirati.
Savjet: Postotak odakrilamidU sekvenciranju ljepila i ljepila proteina nije isto. Ako koristite prerade akrilamid: BIS Rješenje, obavezno nabavite pravu bocu.
· Temed (n, n, n ', n'- tetrametil etilendiamin) je katalizator, u smeđoj boci, smješten u hladnjak. Dodajte neposredno prije ulijevanja ljepila.
· Poliakrilamidna elektroforeza koja se koristi staklo u elektroforezi treba isprati prije i nakon svakog puta. Nakon elektroforeze, operite mekom četkom i krpom u vrućoj sapunici, isperite destiliranom vodom i stanite da se osuši.
· Vlaga i prašina mogu uzrokovati šupljim polimerom. Prije elektroforeze očistite staklenu ploču čistačem stakla i obrišite je mekom četkom. Operite destiliranom vodom i temeljito osušite papirnatim obrisom. Ispiranje sa 70% etanolom prije brisanja papirom pomaže u čišćenju i ubrzanju sušenja. Dodajte uzorke akrilamida sukcesivno: bis, voda, otopina pufera, amonijev persulfat, temped. Dobro protresite i odmah izlijte.
Nije potrebno degantirati poliakrilamid prije polimerizacije. (Akrilamid je bio stavljen u vakuum za uklanjanje mjehurića jer kisik inhibira polimerizaciju.)
Horizontalni savjeti uzorka ljepljive točke.
· Stavite komad crnog papira u donju kutiju, crnu pozadinu kako biste napravili neku rupu uzorka da biste jasnije vidjeli.
· Spremnik za ljepilo ispunjen puferom, tik iznad koloida.
· Ako rub ima svjetlost, uključite svjetla, pustite da svjetlost svijetli koloidom. Nacrtajte uzorak u pipetu.
· Korištenje automatskog uređaja za pipetting.
· U 10-200 MU 1 točka za pomicanje tekućine može se koristiti u većini točaka na uzorku. Za vrlo male rupe uzorka (manje od 10 μ1) duga glava pipete koja se koristi za sekvenciranje ljepila je prikladnija.
· Pipetiranje samo uronjeno u uzorak, udišući polako pomičući tekućinu. Uzorak se može činiti ljepljivim glicerinom, a brzo pumpanje može uvući mjehuriće zraka u glavu pipete.
· Uzorci nakon udisanja glave za pipetting, nježno će se pomicati glava tekućine na rubu cijevi ili brisati papir za usisavanje tekuće glave izvan kapljica. Pazite da uzorak ne sisate.
Stavite uzorak u rupu uzorka
· Uređaj za pipeti za održavanje malo tlaka, učinite da uzorci lagano pomaknu tekuću glavu.
· Glava pipeta umetnuta u pufer, nešto viša od rupa na mjestu, održava pozitivan tlak. Vrh pipete može se umetnuti u malu rupu.
· Polako i postojano uzorci. Vrh pipete postavljen je iznad rupe uzorka točke, a uzorak će potonuti u rupu. Ostavite da uzorak potone da napuni rupu uzorka umjesto da se gurne.
· Jednom kada posljednja pad uzorka s tekućom glavom, tekućina će se pomaknuti na drugu nogu, polako podignite tekući pomak, pomaknite se iz pufera
Kako napraviti uzorkovanje vertikalnog ljepila?
· Okomite rupe uzorka ljepila formirane između dva komada stakla. U vrlo tankom ljepilu glava pipete ne može se ni umetnuti između dvije staklene ploče. Gledajte glicerin! Stavite glavu pipete preko rupe uzorka i uzorak će potonuti u rupu.
· Uzorak točaka prije, obavezno stavite vertikalnu točku uzorka uzorka polipropilen acil gela očišćena. Operite nepolimerizirani akrilamid i vodu koja se može pojaviti na dnu rupe uzorka. Voda može učiniti rupu uzorka znatno manjom. Koristite špricu od 25 ml ili 50ml i iglu od 18 mjerača. Ulijte pufer elektroforeze i pažljivo ispraznijte rupu uzorka.
· Može biti teško vidjeti rupu uzorka, ali istovremeno je ostatak jednostavan. Ako postoje viška rupa, pufer uzorka se može testirati bromofenol plavom bojom.
Vrijeme posta: Mar-31-2023